ADC 药物开发揭秘！三个维度破解稳定性 “黑匣子”来源：bob官方网站 发布时间：2025-04-25 15:40:56
对于生物制药企业而言，蛋白稳定性是贯穿药物研发、生产、质控全流程的重要的条件。在抗体偶联药物（ADC）开发中，“稳定性” 是决定成败的生命线 -- 偶联小分子可能改变抗体构象、引发聚集、加速降解....
德国 NanoTemper 公司推出的Prometheus 蛋白稳定性分析平台给出了革命性答案！
是一种用来医治 HER2 阳性乳腺癌的单克隆抗体药物。而 Kadcyla 则是将 Herceptin 与 DM1 小分子细胞毒性药物偶联而成的 ADC 药物。
的偶联是通过不可还原的硫醚键实现的，平均每个抗体上偶联了 3.5 个 DM1 分子。基于 Herceptin 的抗体仅靶向肿瘤中的 HER2 阳性细胞，随后通过抗体的蛋白水解释放出具有活性的 DM1。DM1会引发肿瘤细胞的有丝分裂阻滞，最后导致细胞凋亡。
关于 Herceptin 及其 ADC 的热变性曲线，可通过 Prometheus 系列蛋白稳定性分析平台搭载的 nanoDSF 微量差示扫描技术能够非常精确地控制样品的热传递，利用蛋白质的内源荧光来监测其在热变性梯度下的展开过程, 从而提供高质量分辨率的数据。
是评估构象稳定性最常用的指标。传统的检测的新方法则是基于热量变化检测的差示扫描量热法（DSC）或者基于荧光染料信号强度变化检测的差示荧光扫描法(DSF)，这两种传统方法的局限性在于蛋白消耗量大、通量低、受到浓度或缓冲液限制。而 Prometheus 配备的 nanoDSF 技术模块可突破传统方法的限制，基于蛋白色氨酸或酪氨酸的自发荧光进行 Tm检测、每个样品仅需 10μl，一次升温实验就可以完成 48 个样品的检测。
深蓝色代表未偶联的裸抗Herceptin（naked mAb），而浅蓝色代表 Kadcyla；Fc1 结构域为第一个峰，对应 Tm1 值，Fc2 结构域和 Fab 结构域合并在一起为第二个峰，对应 Tm2 值；上方是热变性的原始曲线，下方为一阶导数图。
虚线表示不同结构域展开的拐点：通常情况下，Fc1 结构域最先展开，随后是 Fab 结构域，最后是 Fc2 结构域。Fc2 和 Fab 结构域的熔解温度 T
观。简单易懂的一阶导数图犹如 “显微镜”，可深入洞察分子行为。从基础科研到工业化生产，让稳定性分析从‘看见结果’ 升级为 ‘读懂过程’。
的影响程度，熔解温度的降低表明耐热性下降。这些实验进行了三次重复，Tm1 的熔解温度下降更为显著，表明偶联对 Fc1 结构域的影响最大。
1 的峰变宽 。与裸抗体相比，一阶导数峰的宽度增加，这也是 ADC 不稳定的一个迹象，可能是由于与抗体连接的 DM1 小分子干扰了抗体的化学环境，导致其热稳定性降低。峰的变宽程度还可能受到抗体上连接的小分子数量的影响 ，偶联药物分子数量不均一（一般0-8个，平均3.5个）导致不同 ADC 分子的 Fc1 结构域稳定性差异。对于高载药分子：药物连接位点增多，Fc1 结构扰动加剧，使得 Tm1 数值提前；对于低载药分子，结构更接近裸抗体，Tm1 偏移较小。这种异质性使 ADC 在热变性时呈现 “多步展开”，最终表现为峰变宽，因此提醒我们偶联工艺需优化载药均一性以改善稳定性。
由中检院发表的文章通过阿达木单抗对比了 nanoDSF 与 DSC 技术检验测试 Tm的准确性。由于 DSC 检测浓度范围受限， 研究人员在 0.25~1mg·mL-1 范围内作比较。结果显示 2 种方法的 Tm检测结果具有较好的相关性， 各检测浓度下 Tm结果的相关性均达 0.99 以上。
：微量差示扫描荧光nanoDSF 、背反射Backreflection、动态光散射 DLS、静态光散射 SLS，可灵活升级，可同时开启•无需标记样品：利用蛋白质内源荧光检测，不需要添加染料，可进行无标记Thermal Shift Assay•操作简单便捷：仅需 10μL 样品，通过毛细作用上样，一 “吸” 一 “放” 即检测•可升级自动化机械臂，实现全自动无人值守• 兼容去垢剂，可检测高粘度样品• 无液流系统，免维护
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